在抗体药物发展的早期阶段，Protein A亲和层析的核心任务非常清晰：高效捕获，追求极致的回收率。
然而，随着双特异性抗体（bsAbs）、Fc融合蛋白等复杂形式分子的爆发，下游纯化的逻辑正在发生深刻改变。对于越来越脆弱的复杂分子，Protein A不应仅仅是一个“把蛋白抓下来”的步骤，它必须开始回答新的问题：
• 能否提供更温和的洗脱环境，避免低pH诱发的聚集与降解？
• 能否在捕获阶段就拉开单体与聚集体的差距？
• 能否提前分担下游精纯（Polishing）步骤的巨大压力？
针对这些行业痛点，Bestchrom（博格隆）联合Altruist Biologics（夏尔巴生物）共同发布了最新技术白皮书《Beyond Conventional Protein A: Mild Elution and Aggregate Control for Complex Antibody Purification》。
我们将以一款工业级双特异性抗体为模型，带您解锁下一代Protein A如何实现从“产品捕获”到“质量塑造”的角色跃迁。
Protein A是Fc类分子的经典捕获平台。但在处理双抗等复杂分子时，传统填料往往显得“力不从心”。
复杂分子不仅更易受到低pH环境的破坏，产生构象变化和聚集倾向；且在传统洗脱条件下，单体、聚集体和片段往往呈现“一锅烩”的共洗脱状态。高达近10%的聚集体杂质被直接放行至洗脱组分，给后续的离子交换或疏水层析带来了沉重的负担。
因此，对复杂抗体而言，评价一款Protein A的标准正从单一的“抓得住”，进化为：“不仅要抓得住，还要洗得温和，更要分得开”。
在联合技术评估中，我们对比了传统填料（AT Protein A Diamond Plus）与两款新一代工程化填料（Novo-A Diamond 和Extrem A Diamond）。数据展现了新型工程化配基带来的代际优势：
传统填料的洗脱峰顶pH仅为4.29，而工程化填料将这一数值拉升至4.87–5.00。对于低pH敏感的复杂抗体，这一数字的提升不仅意味着更少的降解风险，更赋予了工艺开发极大的操作区间。
Figure 1. Elution pH, defined as the pH of UV peak maximum of bsAb on protein A resins.
在同等双抗模型下，下一代填料交出了截然不同的答卷：
Table 1. 博格隆下一代亲和填料在聚集体降低率上的表现
其中Novo-A Diamond的聚集体移除能力是AT Protein A Diamond Plus的7倍，单体纯度提升了5个百分点以上。虽然单体收率较传统填料略有降低（约85–87%），但换来了纯度的大幅提升及聚集体的高效移除，能显著减轻后续精纯步骤的负担——从整体工艺角度看，利远大于弊。
Figure 2. SEC-HPLC purity, Aggregate reduction percentage and monomer yield of main peak.
为什么新型工程化填料能把聚体“分得开”？答案在于配基设计带来的差异化解离动力学（Differential Dissociation Kinetics）。
在洗脱曲线中，Novo-A Diamond形成了一个极具工艺价值的“聚集体富集拖尾区域（肩峰）”。简单来说：目标单体更容易解离，率先洗脱进入主峰；而聚集体因具有多价Fc结合，解离更慢，被滞留在尾峰。
借此，工艺人员获得了极大的收集策略（Pool-cut）自由度：
• 想要极致纯度？直接截取主峰前段；
• 想要平衡收率？适当放宽收集窗口。
有了分离基础，还能不能再进一步？答案是：可以，只需一点点“盐”。
白皮书进一步探索了洗脱过程中的“助推器”——在流动相中添加50 mM NaCl 或50 mM CaCl₂：
• 效果立竹见影：以Extrem A Diamond为例，不加盐时单体纯度为92.61%；加入50 mM NaCl后，单体纯度跃升至95.79%，同时收率保持稳定。对于Novo-A Diamond CaCl₂的效果比NaCl更显著，能更锐利地切开主峰与聚集体峰。
• 原理很简单：盐离子通过静电屏蔽和疏水调节，放大了单体与聚集体之间的解离速度差异，让“该走的走得更快，该留的留得更久”。
工艺价值：更清晰的峰间拐点，意味着您在收集目标产物时拥有更宽的“操作窗口”——既可以放心地切掉富含聚集体的尾峰提高纯度，也可以适度放宽收集范围以平衡收率，为工业放大提供了极大的灵活性。
Figure 3. Protein A affinity chromatograms for (A) Extrem A Diamond without salt, (B) Extrem A Diamond with 50 mM NaCl, (C) Novo-A Diamond without salt, (D) Novo-A Diamond with 50 mM NaCl, and (E) Novo-A Diamond with 50 mM CaCl₂. (F) Overlay of the chromatograms from (C) to (E).All runs were conducted using a linear pH gradient (pH 5.5–3.0, 20CV) with the specified additives in the mobile phase.
脱离了耐用性的层析填料只是实验室玩具。下一代Protein A必须在温和洗脱的基础上，经受住商业化生产的考验。
在经历150 cycle、0.5 M NaOH CIP 15 min/cycle的严苛CIP后，Extrem A Diamond和Novo-A Diamond的DBC₁₀% 分别保持在初始值的89%和79%。
这证明了该平台不仅“洗得好”，而且完全具备承接大规模、多循环工业制造的卓越稳定性。
Figure 4. Alkaline stability of Extrem A Diamond, Novo-A Diamond and AT Protein A Diamond Plus
Bestchrom与Altruist Biologics的联合研究表明，Protein A正在经历一场深刻的定位转变。它不再是单纯的“Capture resin”，而是一个深具工艺参与度的 “Product-quality shaping platform（产品质量塑造平台）”。
• 温和洗脱，保护分子完整性
Novo-A Diamond与Extrem A Diamond通过工程化配基修饰，将某双抗的洗脱峰顶pH提升至4.87–5.00，有效降低了低pH敏感分子的降解与聚集风险。
• 差异化解离动力学，实现捕获阶段的聚集体控制
Novo-A Diamond的聚集体降低率达66.93%，单体纯度达95.53%, Extrem A Diamond优化后单体纯度可达到95.79%，独特的“聚集体富集集峰”为收集策略提供了主动调控空间。
• 重新定义捕获范式
通过在捕获阶段实质性移除聚集体，后续精纯步骤（离子交换、疏水层析等）的杂质负担显著减轻，为更简洁、更稳健的下游工艺设计创造了可能。
如果您正在开发双抗、Fc融合蛋白或其他低pH敏感的复杂分子，下一代Protein A将为您提供兼顾分子完整性、高纯度与工业稳定性的破局之选。
本文核心数据与观点基于Bestchrom与Altruist Biologics联合发布的英文白皮书整理。该研究结合了Bestchrom在工程化Protein A亲和层析技术平台上的创新，与Altruist Biologics在工业级复杂抗体下游工艺开发中的深厚经验，系统评估了下一代Protein A在温和洗脱、聚集体控制和工艺窗口拓展中的实战价值。
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