还在为重组蛋白纯化步骤繁琐、杂质难除、收率低而头疼？告别单一模式束缚，拥抱“多面手”填料——多模式层析，它正在成为生物工艺中的秘密武器！它如何解决你的痛点？快来看看吧！
多模式层析也叫混合模式层析或者复合模式层析，它结合了多种相互作用力，比如离子交换、疏水作用、氢键等。传统的层析方法通常只依赖单一的作用力，比如离子交换主要靠电荷，疏水作用层析主要靠疏水性。而多模式填料的不同之处在于，它的配基设计能同时提供多种作用方式，这样在纯化过程中就能更灵活地应对复杂的样品。
重组蛋白表达后，宿主细胞会有很多杂质，比如宿主蛋白、核酸、内毒素，还有蛋白自身可能聚集形成多聚体。传统的纯化流程可能需要好几步，每一步优化起来较为麻烦，而且收率可能会因为步骤增多而降低。这时候多模式层析的优势就体现出来了，因为它可以整合多种作用力，减少工艺步骤，提高收率。
为什么说它是重组蛋白纯化的“利器”？四大优势直击痛点！
面对结构极其相似的“捣蛋鬼”（如蛋白聚集体、降解碎片、电荷异构体），传统方法可能“傻傻分不清”。多模式填料凭借多重作用力组合，比如Diamond MMC是具有苯环和羧基的复合基团，能更精准地识别并抓牢目标蛋白，轻松甩掉这些难缠杂质，纯度更高！
纯化前必须稀释或透析样品降低盐浓度？太麻烦！多模式填料的一大亮点就是能在较高盐浓度下工作。
革命性应用：直接捕获！ 澄清后的细胞培养上清液（通常盐分高）可以直接上样！省去稀释/缓冲液置换步骤，简化流程、节省时间、降低成本、减少样品损失，收率自然提升。
洗脱目标蛋白不再局限于单一方式（如只靠高盐或pH变化）。通过巧妙调节pH、盐浓度或添加特殊试剂，可以选择性地削弱某一种或几种作用力，实现温和、高效、特异性强的洗脱，保护蛋白活性。
更高的选择性和载量意味着可能减少纯化步骤。例如，一个设计精良的多模式步骤，可能同时完成传统上需要“离子交换 + 疏水层析”两步才能达到的效果，缩短工艺时间，提高整体收率，降低生产成本。
博格隆研发数种多模式填料，供广大生物工艺从业者进行选择，包括MMC系列多模式层析填料、MIX-A系列多模式层析填料、Layer系列多模式层析填料。同时，提供填料或者预装柱的形式方便工艺开发或者中试、生产人员进行使用。
Fig.1 Diamond MMC层析纯化图谱
• 层析柱：Ezload 50/20 Diamond MMC
• 平衡液：20mM PB、0.4M NaCl，pH6.5
• 洗脱液：20mM PB、1.5M NaCl，pH6.5
• 样品：300mL某重组蛋白毕赤酵母发酵液
泳道1：Marker 泳道2：洗脱
泳道3：发酵液 泳道4-8：流穿
Fig.2 电泳图
随着层析介质使用次数的增加，污染物在层析柱上的积累也在不断增加，定期的在位清洗能有效防止污染物的累积，保持层析介质稳定的工作状态。客户可根据使用过程中介质的污染程度确定在位清洗的频率（如果污染较严重，建议每次使用之后都进行在位清洗，以保证结果的可重复性）。
对于不同类型的杂质和污染物建议清洗条件如下：
• 结合比较紧密蛋白的去除：用2~3柱体积的2M NaCl清洗。
• 强疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3个柱体积的1M NaOH清洗，然后立即用5~10个柱体积的纯化水清洗。
• 脂蛋白和脂类物质的去除：先用5~10个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，然后用5~10个柱体积的纯化水清洗。也可将上述两种清洗条件结合进行清洗，如用含有1M NaOH的30%异丙醇溶液清洗。
2025年07月02日
2025年06月27日
2025年06月18日
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