阳离子交换填料在胶原蛋白纯化中的应用
前言
胶原蛋白具有良好的生物学特性,在组织工程、医疗器械、医学美容、化妆品、食品工业和包装材料等方面都有着广泛的应用。随着生物技术的不断进步,重组人源胶原蛋白的表达、纯化及改性技术取得了显著突破,不仅提高了胶原蛋白的纯度、活性和安全性,还推动了胶原蛋白产品的个性化发展,满足不同消费者的定制化需求。本文聚焦博格隆阳离子层析介质,介绍其在重组胶原蛋白纯化中的应用。
重组胶原蛋白的生产工艺概述
重组胶原蛋白是通过DNA重组技术制备的胶原蛋白。现已有多种表达系统应用于重组胶原蛋白的生产,包括大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞等表达系统,相较动物来源的胶原蛋白,具有产率高、成本低、周期短等优势。重组胶原蛋白的生产工艺路线如下图所示,包括发酵、澄清、层析纯化、浓缩/换液、无菌过滤等步骤。

Fig.1 重组胶原蛋白的生产工艺
重组胶原蛋白对pH敏感,适合偏酸性的缓冲体系,因此常把阳离子交换层析用于可溶表达的重组胶原蛋白纯化。博格隆的SP Bestarose FF和CM Bestarose FF层析介质具有高流速和高载量特点,适合衔接离心澄清后的样品,快速获得重组胶原蛋白纯品。Diamond CD-S因其高分辨率特点,还可作为精细纯化层析步骤,去除重组胶原蛋白相关的小分子和聚体形式,实现高纯度重组胶原蛋白的生产。
应用案例
• 案例1: SP Bestarose FF层析纯化重组XVII型胶原蛋白
样品:与平衡溶液的电导和pH一致

Fig.2 SP Bestarose FF层析纯化图谱
该案例中,流穿中不含目的蛋白,继续提高电导进行洗脱,获得高纯度胶原蛋白。
• 案例2: CM Bestarose FF层析纯化重组XVII型胶原蛋白
样品:电导4.9 mS/cm,pH4.0

Fig.3 CM Bestarose FF层析纯化图谱
该案例中,经线性pH和电导优化,分别确定洗杂和洗脱条件,最终实现等度洗脱工艺,一步层析纯度为91.16%。
• 案例3: Diamond CD-S层析去除III型重组胶原蛋白降解片段
样品:Diamond Phenyl(HS)捕获的III型重组胶原蛋白,调节电导和pH与平衡溶液一致。

Fig.4 Diamond CD-S层析纯化图谱
此案例中,Diamond Phenyl(HS)纯化后的胶原蛋白仍存在少量降解形式,经Diamond CD-S层析,降解分子流穿,洗脱获得大部分目标分子,且无明显杂带。
总结
合理的纯化策略和高效的层析介质是确保胶原蛋白产品质量的关键。博格隆阳离子层析介质以其优异的分离纯化效果和良好的批间一致性,可广泛应用于胶原蛋白从实验室到工业化生产的分离纯化工艺中。
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