解决方案 | 装柱教程 Chromdex200 PG
上期讲了AT ProteinA Diamond 装柱教程,本期将讲Chromdex200 PG的一次成功装柱实验过程。
1.首先准备实验器材:柱管BXK 16/70 装柱器 BXK 16/70 Chromdex 200PG 2019030401批次 计算需要胶的量:抽干胶/1.15=预装体积(60cm)。先用水置换掉乙醇保存液,称取抽干胶130g,加水至280ml(胶悬液浓度48%),用玻璃棒搅匀备用;连接AKTA排掉上柱头膜内气泡备用;排掉下柱头膜内气泡后装上柱管与装柱器,置于铁架台,水平仪调整后将胶悬液一次性倒入,装上柱头开始压。
2.设置流速3ml/min,打开柱子下阀,压柱90min。此时胶面高度:68cm
3.停止流速,关闭下阀门,取下上柱头,将装柱器内液体排出,取下装柱器,装上上柱头,拧紧密封圈。
4.将压力调成5.7Bar,恒压模式压,打开柱子下阀,压柱40min。此时胶面高度:62.5cm
5.停止流速,快速(一般在10秒钟内完成)将上柱头下压至原先胶面高度下0.5cm,最终柱高:62cm
装柱过程压力与流速
以水为流动相,1%丙酮测柱效,上样1%CV(1ml),流速0.5cm/min,实验结果:柱效11820N/m。
注:不同柱高,不同直径的层析柱装填所用到的最佳压力流速条件不同,可根据本次实验结果基础上进行探索。
2022-10-27 10:17